細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系來(lái)自 8 歲黑人男性的組織。其染色體模式數(shù)目為 60，在裸鼠中能致瘤。

該細(xì)胞系含有乙型肝炎病毒基因組，需在 2 級(jí)生物安全防護(hù)下操作。STR 結(jié)果如

下：Amelogenin: X；CSF1PO: 8；D13S317: 12,14；D16S539: 10；D5S818: 13；D7S820:

8,10；THO1: 6,7；TPOX: 9；vWA: 17。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：肝

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10 6 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5)

用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存：干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL 凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收

到后-80 度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存

管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25 瓶復(fù)蘇的存活

細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，若發(fā)

現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?4 或 5X 顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20

×）各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在 37℃培養(yǎng)箱中放置 2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁

情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡

下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在 60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁

的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基 6-8mL，

放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá) 70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行

傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)

明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建

議 T25 培養(yǎng)瓶 1：2 傳代 。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備 MEM 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；1%L-谷氨-酰胺, 1%NEAA, 1%丙酮

酸鈉,

雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱

濕度為 70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：

將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含 4-6mL 培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含 6-8ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）

中 37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋-白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75

瓶 2-3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化

時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿

回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL

培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照

說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際

情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)

使用。下面 T25 瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血

球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為 1×10 6~1

×10 7個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm 離心 3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每

1ml 凍存液含 1×10 6~1×10 7 個(gè)活細(xì)胞/ml 分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到

凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80 度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器

中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，

并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍

存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)

致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3. 本產(chǎn)品僅限科研用途。