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詳細介紹
低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,簡稱為LDL)是通過脂蛋白酯酶的水解作用,脫去極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三脂,釋放游離脂肪酸轉化而來的。因甘油三酯的去除使得膽-固醇所占比例提高,增加顆粒本身密度,從而得到LDL。LDL與脊椎細胞表面的受體特異性結合,然后通過受體介導的內吞作用將膽-固醇運輸到全身各處細胞。因此,LDL可以用來研究受體介導的內吞作用過程,尤其是在動脈粥樣硬化等疾病中,血漿來源的LDL還可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。
紅色熒光標記人源低密度脂蛋白(Human DiI-LDL)是標記熒光探針Dil(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)的LDL,可以用來觀察培養細胞的LDL結合位點,或篩選LDL受體表達缺陷型細胞突變株。也可以通過流式細胞術評估細胞受體水平,或檢測組織內的受體水平。 DiI-LDL是研究細胞內吞作用非常好的標記物。
濃度:0.8-3.0mg/ml
性狀:乳狀液體
緩沖液組分:PBS(含EDTA),pH7.2-7.4
保存:2-8℃避光,效期6周,避免凍存
操作流程
1 工作液制備:無菌條件下,將DiI-LDL用細胞培養基稀釋至20-40 µg/ml。
2 細胞準備:吸除培養板內培養基,向活細胞內加入上述LDL,37℃培養4-5小時。
3 孵育結束,吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養基,并用無探針的培養基洗幾次。
4 根據實驗需求用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
a熒光顯微鏡觀察
采用標準的羅丹明激發:發射濾光片(或建議使用波長為:Ex/Em=549nm/565nm);若需要請使用含3%甲醛的PBS進行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因Dil易溶于有機溶劑。注:需設陽性細胞做對照。
b)細胞分選(流式細胞術)
胰-蛋白酶處理細胞或者加入EDTA制成單細胞懸液,選用合適的已標記純化細胞用作陰性和陽性對照,從而進行流式分選設門(gate)。(建議使用波長為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm)。
注意:
Human DiI-LDL稀釋后的工作液不穩定,建議現配現用,避免凍存。
為了您的健康,請佩戴一次性手套。
本產品僅限科研用途。
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