產(chǎn)品簡介

     辣根過氧化酶使試劑中的發(fā)光物（Luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強劑這使得發(fā)光增強了 1000

倍。在免疫印跡中，將復雜的蛋白混合物經(jīng) SDS-PAGE 分離，并轉(zhuǎn)移到固相膜上（如 NC、PVDF）等，用于免疫學檢測，經(jīng)HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應。當加入免疫印跡化學發(fā)光試劑后，Luminol 發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長為 428nm 的光，此光可經(jīng) X 光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。

本試劑是非放射性發(fā)光系統(tǒng)，用于檢測固定在膜上的蛋白，其敏感性達皮克級。用 X 光片可快速地獲得硬拷貝結(jié)果。所含獨特的底物足以維持 12 小時以上的發(fā)光，便于反復曝光操作，免疫印跡膜經(jīng)抗 體脫卸處理后可供再次抗體探查使用。適用于痕量蛋白或核酸檢測。特別節(jié)省抗體(一抗 1:500-1:5000， 二抗 1:3000-1:10000)。

保存及運輸條件: 室溫密封避光保存,至少一年有效。

使用方法

1. 印跡膜制備 按常規(guī)方法完成SDS-PAGE和電轉(zhuǎn)膜操作，適當?shù)姆忾]非常重要。可以通過標記一抗或二 抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯(lián)物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要，在與HRP 交聯(lián)物溫育后，膜片更需仔細洗滌，所有步驟均在室溫下完成。

2.化學發(fā)光試劑的配置在使用前等量混合Ⅰ液和Ⅱ液（SolutionⅠ+Solution Ⅱ相同體積），混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下 振蕩溫育2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。

3.蛋白信號顯現(xiàn)

1). 用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙以吸去過量試劑，置膜片于二層保鮮膜之間，小心趕盡氣泡。

2). 將膜片吸附蛋白面朝上，置于 X 光片盒中，于暗室中壓上 X 光片。

3).根據(jù)信號的強弱適當調(diào)整曝光時間，一般1-60s，也可選擇不同時間多次壓片，以達最佳效果。顯影沖洗。

4). 調(diào)節(jié)曝光時間，再次曝光顯影。

4、膜的重復使用： 配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巰基乙醇的溶液，膜放入后，70℃振蕩水浴30分鐘。 再用TBST或PBST緩沖液洗脫，最后用脫脂牛奶封閉。

注意事項

1) 加入一抗后膜不能再干燥；

2) 適當?shù)胤忾]和洗滌膜片至關重要；

3) 使用前配置化學發(fā)光試劑，配置足夠覆蓋膜片即可，棄去使用過的混合試劑；

4) 使用干凈取樣頭取用每種試劑；

5) 第一張片子建議曝光5s，觀察結(jié)果后判斷最佳曝光時間可1秒至1min不等；

6) 除了放射自顯影片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作；

7) 膜片可經(jīng)適當方法洗脫原有抗體，再次印跡使用，它不像生色物質(zhì)需要從膜片上清除底物。

8) NaN3能抑制HRP活性，應避免使用NaN3。

9) 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

10) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。